慢病毒介导酪氨酸激酶受体A过表达载体促进神经干细胞增殖和分化的实验研究

摘要：

目的 探究酪氨酸激酶受体A(Trk A)过表达载体对神经干细胞增殖和分化能力的影响.方法 取SD大鼠海马组织进行提取神经干细胞,采用免疫荧光的方法对神经球进行鉴定,利用siRNA技术构建Trk A过表达载体,将培养的神经干细胞分成三组,空白对照组为未做任何处理的细胞组,阴性对照组是经空白载体的慢病毒转染的细胞组,实验组是由Trk A的过表达载体构建的慢病毒转染细胞组.逆转录PCR(RT-PCR)检测Trk A和神经干细胞分化标志基因Tuj1,GFAP和CNPase的表达,CCK-8试剂盒检测各组细胞的增殖率.结果 免疫荧光染色显示神经干细胞细胞球Nestin(红色荧光),Brud染色(绿色荧光)阳性,且占细胞量的90％以上;荧光双标染色(棕色荧光)显示双染细胞量占总细胞量的90％以上,说明培养的细胞是神经干细胞.慢病毒滴度的检测结果:Trk A过表达慢病毒载体转染滴度为3×108 TU/mL.RT-PCR结果表明,空白对照组(1.09±0.09)和阴性对照组(1.11±0.05)的Trk A的mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05),实验组的Trk A的mRNA相对表达量(7.12±1.32)要明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);神经干细胞分化标志基因Tuj1,GFAP和CNPase的表达与Trk A相同.CCK-8试剂盒检测结果表明,空白对照组、阴性对照组及实验组的细胞增殖率分别为(87.92±9.21)％、(88.22±9.37)％、(176.01±11.33)％(F=18.082,P<0.05),其中空白对照组和阴性对照组的细胞增殖率比较差异无统计学意义(P>0.05),实验组的细胞增殖率要明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05).结论 Trk A过表达载体可以促进神经元干细胞向神经元细胞,星型胶质细胞和少突胶质细胞的分化,并且可以促进神经元干细胞的增殖.

关键词：受体、Eph家族、神经干细胞、慢病毒属、转染、增殖、分化、大鼠、Sprague-Dawley

所属期刊栏目：24

资助基金：湖北省自然科学基金面上项目;中央高校基本科研业务费专项资金武汉大学青年教师资助项目;武汉大学医学部创新种子基金培育项目

在线出版日期：2020-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2410-2414,后插3