ABCC2基因过表达细胞株的建立及鉴定

摘要：

目的：构建携带 ABCC2基因的慢病毒载体，转染 HEK293细胞，筛选出稳定过表达 ABCC2基因的细胞株并进行鉴定，为体外实验确定与多药耐药相关蛋白2（MRP2）外排转运相关的底物药物及其转运机制提供细胞模型。方法根据 GenBank提供的 ABCC2基因 cDNA 序列设计引物，PCR 扩增该基因并将其连接至慢病毒载体 PZE －LV105，包装病毒并感染 HEK293细胞。用嘌呤霉素进行筛选得到过表达 ABCC2基因的稳转细胞株，通过基因测序、实时荧光定量 PCR（RTQ －PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）对稳转细胞进行鉴定。结果测序结果证明重组慢病毒过表达载体所携带的 ABCC2基因序列与 Gen-Bank 提供的 ABCC2序列一致；RTQ －PCR 分析结果显示转染了 ABCC2基因的 HEK293细胞中 MRP2的 mRNA 相对表达比正常 HEK293细胞和空白载体对照 HEK293细胞高出约320倍；蛋白免疫印迹试验显示，转染了 ABCC2基因的 HEK293细胞中MRP2蛋白表达水平比正常 HEK293细胞和空白载体对照 HEK293细胞高出约150倍。结论该实验成功构建了稳定过表达ABCC2基因的细胞株，该细胞株可用于初步筛选确定 MRP2的特异性外排转运底物及其转运机制。

关键词：ABCC2 基因、过表达、慢病毒载体、HEK293 细胞

所属期刊栏目：20

分类号：R73;R5

在线出版日期：2016-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：433-436