重组蛋白HSP65-6×(IA2-P2)-His的构建、表达及分离纯化

摘要：

目的 构建HSP65-6×(IA2-P2)-His表达载体并研究其在大肠杆菌中的表达及分离纯化.方法 通过酶切酶连的方法将6×(IA2-P2)-His替换pET-28a-HSP65-6×P277中的6×P277,构建好的载体经DNA测序分析构建成功.乳糖诱导表达的蛋白经Ni+柱分离纯化.最后用SDS-PAGE及Western blot鉴定目的蛋白.结论 HSP65-6×(IA2-P2)-His最高表达量占菌体总蛋白的65%,超声破碎后蛋白以可溶性的形式存在于裂解上清中.Ni+柱纯化后蛋白纯度可达80%电泳纯以上.最后Western blot鉴定目的蛋白具有抗原性和His标签.结论 重组载体pET-28a-HSP65-6×(IA2-P2)-His成功转入BL21中,以可溶性的形式高效表达,该工作为进一步验证融合蛋白的生物学活性奠定了一定的基础.

关键词：重组蛋白、发酵、纯化、鉴定

所属期刊栏目：17

分类号：R39;TQ4

资助基金：国家自然科学基金20672464,81172973,31270985;中央高校基本科研业务费专项资金资助JKY2011060;国家级大学生创新创业训练计划项目资助C12066

在线出版日期：2013-06-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：732-734