用PCR技术从cDNA文库中获取目的基因长片段

摘要：

目的建立一种简便有效的获取cDNA大片段的实验技术.方法应用PCR原理,设计特异引物结合文库载体引物对大鼠胎肝cDNA文库进行PCR扩增;用随机引物标记法标记已知小片段"目的基因"(300bp±)作为探针,对PCR产物进行Sorthern杂交以检验"目的基因"片段的正确性及长度;回收"目的基因"片段并连接人PGEM-T载体,转染JM109并扩增后,提取"目的基因"测序.结果琼脂糖凝胶电泳发现PCR扩增产物有多条不同长度的段,Sorthern杂交发现一段长度为1.5kb的cDNA片段为"目的基因";测序结果与GeneBank进行Blaste分析,该基因为一株新的序列,已在GeneBank中登录注册(Rat Liver Regeneration-relatedProtein 1,RLRP-1 AF236054).结论应用PCR结合Sorthern杂交等手段可迅速从cDNA文库中获取长片段目的基因.

关键词：基因、实验方法、PCR

所属期刊栏目：7

分类号：Q7(分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金39670366;安徽省自然科学基金00044202

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：58-60