猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达及其抗原性分析

摘要：

根据GenBank中登录的PCV-2序列,设计1对特异性引物,PCR扩增 PCV-2去除核定位信号(nuclear localization signal, NLS)的Cap蛋白基因,经Bam HI和Xho I双酶切后将其插入到表达载体pEGX-4T-1多克隆位点,并转化到表达菌株Rossetta(DM3)中,采用IPTG进行诱导表达,采用SDS-PAGE薄层灰度分析表达情况,收集菌体,使用GST-Protein Purification Kit亲和层析纯化方法对表达的GST-Cap融合蛋白蛋白进行纯化,SDS-PAGE电泳检测纯化效果,Western blot分析纯化后的重组Cap蛋白(rCap)免疫学活性.结果表明,成功克隆了大小为579 bp去除核定位信号的ORF2基因,成功诱导表达出预期大小45.3 ku相一致的rCap蛋白,表达量占总菌体的25%,纯化后的rCap蛋白SDS-PAGE电泳分析纯度达到90%以上,Western blot分析表明纯化的rCap蛋白能与PCV-2阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫学活性.

关键词：猪圆环病毒2型(PCV2)、原核表达、抗原性分析

所属期刊栏目：38

分类号：S858.282.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省自主创新成果转化重大专项计划2008ZHZX1A1103

在线出版日期：2011-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：55-58